Dieta hipoNA

Recomanacions generals per a MCV
Dietes Hiposòdiques

Aquesta dieta esta pensada
per a individus amb malaltia
cardiovascular, amb un IMC de un 18,9 fins a un 24,9, hi a més a més per a
individus que estan amb sobrepès, que tenen que reduir entre un cinc hi un deu
per cent del seu pes total.
Una dieta hiposòdica o
moderada, conte entre 1.500 a 2000 mg de sodi (Na) al dia (equival a un màxim
de 5g de clorur de sodi al dia). La qual cosa no fa falta introduir sal al aliments a l'hora de cuinar ja que tots
els aliments contenen una mínima quantitat de Na, sobretot aliments de la
agricultura ecològica, ja que aquests aliments per l'aigua, terra... en
contenen la suficient quantitat de sal. Encara que hem de tenir en compte que a
l'hora de cuinar una petita quantitat de minerals (el Na, entre altres ) es
volatilitzen, hi per aquest motiu es aconsellable ingerir un cop al dia
aliments crus.
A la taula I es pot observar
els aliments des/aconsellables per a dietes pobres en Na.


Aconsellables


Desaconsellables




Carns, aus, vísceres, ous


Sal de taula, iodada,
marina...




Peix fresc d’aigua dolça


Carns salades, curades,
fumades




Llet i derivats(sense sal)


Peixos fumats, assecats i
caviar




Farinacis, biscotes (no
més de 50gr al dia)


Embotits i formatges en
general




Fruites, verdures


Sopes de sobre, xips




Pastellaria casera


Pastisseria industrial,
sucs envasats, aigua amb gas i derivats




Olis vegetals, mantegues
sense sal (no més de 15gr al dia)


Conserves en general, espinacs (nivells
elevats de Na)



Recomanacions generals per a
cuinar sense sal:
Coure al vapor, a papillota, estofats, guisats, o a la planxa.
Potenciar el sabor amb:

Àcids: vinagre, llimona...
Espècies: curri, safrà, canyella...
Herbes aromàtiques: farigola, romaní, menta, julivert...

A la taula II es pot
observar un menú per a tot el dia amb un 1500kcal.

El desorden que conlleva tener niveles bajos de B9 durante el embarazo

Palabrasclave: B9, embarazo, ingesta, sistema nervioso

Resumen

Los niveles bajos del ácido folicodurante el periodo preconcepcional y después de dar la luz impulsan a un desorden del sistema nervioso en los bebés y losniños (menores de 9 años).

Texto

Lavitamina B9 también conocida como; folato, ácido folico, ácidoptercilmonoglutámico o vitamina M. Pertenece al complejo de lavitamina B, y además es hidrosoluble.

Esfundamental para nuestro organismo, sobre todo a nivel celular ya quetransmite caracteres genéticos, y sintetizar ARN (necesario para laformación de proteínas). En diversas funciones trabajaconjuntamente con la vitamina B₁₂. Es muy importantedurante la gestación y producción de tejidos, formación del feto yembrión.

Estavitamina es necesaria en todas las edades, pero sobretodo es muyimportante la ingesta de folato en la mujeres embarazadas (600mcg/día), en períodos de lactancia ( 500-550 mcg/día), y en losbebés (64 mcg/día), ya que sino implica una malformación delsistema nervioso entre otros.

Segúnun estudio realizado en USA por el “Journal of child psychologyc”indica que tener unos niveles saludables de vitamina B₉ tiene un desarrollo vigoroso del sistema nervioso en los bebés y niños entre 7 y 9 años, ya que estos niveles inferiores de losrecomendados favorece a tener problemas de hiperactividad y undéficit de atención, sobretodo, en los niños.

Ademásla deficiencia de ácido folico en la mujeres embarazadas se ha vistoque, la circunferencia de la cabeza de los recién nacidos esnotablemente inferior. También hay que tener en cuenta que un bebéprematuro o con bajo peso al dar a luz puede tener una de estasmalformaciones; ancefalia, espina bífida, labio leporino.

Esfrecuente que de cada 1000 recién nacidos uno tenga estamalformación, además el 95% de los bebés que nacen conalteraciones, no tienen antecedentes familiares respecto a estasenfermedades. Incluso el 50% de los casos se pueden prevenir ya seaaumentando la ingesta de alimentos ricos en vitamina B9 o tomandosuplementos, entre 1 y 4 mg durante el primer trimestre, teniendo encuenta que se recomienda según la IDC de unos 600mcg/día durante elembarazo.

Apartir de este estudio podemos concluir, antes, durante el embarazo ydurante la lactancia es muy importante tener unos niveles de IDArecomendados por la OMS e incluso no afectaría negativamente teneruna dosis medianamente elevada de vitamina B9, ya que si no favorecea tener malformaciones graves al bebé e incluso implica alabortamiento para no perjudicar a la criatura.

Identificación de los parásitos helmintos en las muestras de los tejidos de los peces

Práctica nº14

Identificación de los parásitos helmintos

en las muestras

de los tejidos de los peces

Objetivo

Determinar la morfología de las larvas presentes en los animales marinos de consumo humano ( especialmente en los peces).

Introducción

Los parásitos son organismos que viven dentro de un otro organismo vivo y de este obtienen los nutrientes para poder proliferarse. Estos no pueden sobrevivir fuera del hospedante.

Los parásitos de los humanos incluyen entre otros a los virus, riquiestas, hongos, protozoos, etc...

Además en muchos casos estos parásitos dañan al organismo hospedante. Y produce una parasitismos intestinales son infecciones que se producen mayoritariamente en el aparato digestivo del ser humano. Y estos son observables en las heces en el hígado.

Estos son algunos de los helmintos y protozoos intestinales que se encuentran;

• Taenia.ssp

• Giardia.ssp

• Necator.ssp

• Anisakis.ssp

Anisakiasis es una enfermedad frecuente en todo el mundo causada por la absorción de larvas (cuerpo alargado y blando de color blanco). Estos parásitos están presentes en los mamíferos marinos.

Anisakiasis aparece sobretodo en los peces crudos y poco hechos, ya que de este modo las larvas de anisàkiasis. Estas larvas son observables en examinar estos mamíferos marinos (peces) en la lupa binocular, pero previamente se debe de se ha de diseccionar.

Material

• Tijeras de disección

• Pinzas / Pincelitos

• Punzón

• Microscopio óptico

• Muestras de peces

• Regla milimétrica

• Solución salina fisiológica

• Portaobjetos

• Cubreobjetos

Procedimiento

Con una regla milimétrica medir la longitud del animal marino (pescadilla, mayra, sardina...), y describir conscisamente.

• Distinción de las diferentes partes del pez

Diferenciar las principales partes superficiales (cabeza, ojos, boca, dientes, alas, cola....) del animal que son esenciales para manipular posteriormente.

En el momento de diseminar al animal distinguir el aparato digestivo, circulatorio, reproductor y excretor.

• Inspección del pescado para localizar parásitos helmintos

Con la mano izquierda se cogerá la pinza y se sujetara la aleta pectoral y con la mano derecha se sujetará el bisturí y realizará un pequeño corte, para que posteriormente con la ayuda de las tijeras de disección se hará un corté hasta el ano.

Se hará el corte cuidadosamente, ya que posteriormente hay que observar la anatomía externa de mamífero marino. El corte se realizará desde aleta pectoral hasta orificio anal que esta junta la aleta anal.

Una vez realizada la disección, con la ayuda de las pinzas se extraerán las diferentes estructuras anatómicas del pescado, para poder observar si en estas partes hay larvas.

Luego se examinará el resto del animal ya que las larvas posteriormente se encuentran en el musculo del animal.

• Identificación de los géneros de los parásitos helmintos detectados

Se intentara observar a simple vista a las distintas larvas que se han podido localizar.

Y posteriormente con la ayuda de la lupa binocular se observara las larvas profundamente para poder distinguir las partes esenciales de este parásito, con la ayuda de la tabla, donde salen las características de estos.

Se cogerán un cubreobjetos y un portaobjetos estériles. En el portaobjetos se introducirá una gotita de la agua fisiológica salina y con la ayuda de una pinza se cogera una larva cuidadosamente, para no chafar al parásito y se cubrirá con el cubreobjetos y ya esta listo para poder observarlo en la lupa binocular.

Resultados

El animal tenía una longitud de unos dieciséis centimetros de color grisáceo, y dentadura de este animal puntiagudo y pequeños.

A este mamífero marino se le conoce como pescadilla o merluza.

Reino	Animalia
Fílum	Chordata
Clase	Actinopterygii
Orden	Gadiformes
Familia	Merluciidae

Taula 1: Clasificación científica

Las larvas analizadas de esta familia parece que pertenezcan a larvas de anisakis.

En este animal se han podido encontrar más de veinte larvas.

Estas larvas tienen una longitud de unos quince milímetros, presentan un color blanco y son muy movibles, y están retorcidas sobre si mismas.

Las puntas de estas larvas son redondeadas.

Dibuix 1: Larva de anikasi, procediente de la pescadilla

Los parásitos de Anisakis spp, son larvas nematodas.

Las larvas se encuentran en el aparato digestivo, si el animal marino es fresco, aunque luego van migrando en los músculos de este animal.

Este pescado que se ha estudiado se ha recogido del mercado “Sant Adrià del Besós”

del mar Mediterráneo.

Contra más grande es el mamífero marino más parásitos se encontraran ya que se ha desarrollado más, se ha alimentado más que un otro pescado pequeño. Además a vivido mucho más tiempo que un pez con un tamaño inferior a este.

N.común	Anisakispp	Pseuoterranovaspp	Contacaeum.ssp	Hystherolytalaccium.spp
Pescadilla	X
Mayra	X
Mayra			X

Taula 2: Nombre de los parásitos

Discusión y Conclusiones

Para poder realizar una disección es esencial saber tanto como la anatomía externa y interna, ya que al efectuar el corte des de la aleta pectoral hasta la aleta anal. Además facilitará la observación de los aparatos ; digestivo, circulatorio, excretor, reproductor.

Es bastante complejo diferenciar las diferentes partes (dientes, boca, intestino) de una larva, pero aún y asín por la movilidad que muestran estos parásitos facilita la identificación de estas especies.

Confirmación de la presencia de S.aures en los alimentos

Práctica nº 12 (5nta parte)

Confirmación de la presencia de

S.aures en los alimentos

Objetivo

A partir de tres antibióticos (Novobiocina, Polimixines, Deferoxamines) determinar la sensibilidad que tienen las dos especies de S.aureus y S.epidermis. Que se observa a partir del diámetro que se forma alrededor del antibiótico.

Introducción

El sistema antimicrobiano es uno de los métodos que se utiliza para confirmar la asistencia de la especie de S.aureus en los alimentos.

Los principales antibióticos que se utilizan en el sistema anitmicrobiano son los siguientes;

• Deferoxamina es un agente quelante de hierro.

• Novobiocina es activa en frente S.epidermidis. Inhibe el crecimiento de especies Proteus

• Polimixines es un polipeptido producido por una cepa llamada Bacillus polymixa. Su actividad se limita a las bacterias gram negativas.

Son modelos de sensibilidad natural en agar de las bacterias a estos antibióticos que se valoran incubando los durante veinticuatro horas. Después del periodo prolongado se forma un halo de inhibición, y cada antibiótico tendrá un diámetro distinto ya que no afecta con la misma intensidad tres distintos antibióticos a una especie.

Material

• Deferoxamina (250µg )

• Novobiocina (5µg )

• Polimixines (150µg )

• Placas de petrio

• Hisopo

• Tubo de plástico

• Agua salina fisiologica

• Cultivos puros de S.epidermidis y S.aureus

• Nansa de kolle

• Bec Bunsen

• Alcohol

• Vórtex

• Regla

• Pinzas

Procedimiento

En un tubo de plástico estéril se introducen cinco mililitros de agua fisiológica salina de una concentración de cero coma nueve por ciento, después con la ayuda de una nansa se agregan cepas.

• Tubo uno

Primero se esteriliza la nansa de Rolle con la ayuda del Bec Bunse, una vez desinfectado este instrumento se cogen cepas puras de S.epidermidis dos o tres o más (si tienen un diámetro pequeño) y se homogeneiza con la ayuda del vòrtex durante treinta segundos.

Luego con un hisopo estéril se sumerge en el tubo de plástico estéril homogeneizado y se hacen unas estriás encima de la placa de petrio.

Se coge una pinza y se esteriliza primeramente con alcohol y posteriormente con Bec Bunsen, (es preferible hacer esta práctica en el flujo laminar ya que sino se puede contaminar todo el trabajo) se coge un antibiótico y se introduce en el medio de cultivo y asín con los otros dos antibióticos en diferentes puntos de este diámetro, dejando un espacio para no confundirse después del periodo de incubación.

• Tubo dos

Se hace el mismo método pero en este tubo se sumergirán cepas puras de S.aureus. Una vez homogeneizado el tubo de plástico se baña el hisopo y se hace una estriá en la placa de petrio.

Las pinzas deben de estar estériles ya que si no todo el pote de antibióticos se contaminaría, y poner los tres antibióticos en tres puntos distintos del medio.

• Tubo tres

Con la misma técnica se coge una nansa de Kolle esterilizada un la disolución fisiológica salina de cero como cinco mililitros y se introduce socas sospechosas a S.aureus procedentes del medio de cultivo Baird Parker (BP y se homogeneiza en el vórtex durante treinta segundos. ). Y con un hisopo estéril se introduce en el tubo de plástico y se hacen estrías en la placa de petrio.

Con una pinza estéril se cogen un antibiótico y se deja en un punto de esta circunferencia y de esta modo se hace con los demás antibióticos.

• Incubación

Se incuban durante un día a treinta y siete grados.

Para que posteriormente se puedan leer los resultados.

El día siguiente se ha vuelto ha hacer la misma práctica ya que no a salido lo que se esperaba des de un principio (no habían suficientes socas para que se desarrollen) y está vez se han introducido más colonias, que en las anteriores prácticas.

Resultados

Después del periodo de incubación, se examinan las placas de petrio.

Se puede observar en algunas muestras que han crecido hongos y esta proliferación manifiesta la resistencia que tienen estos microorganismos respecto a estos antibióticos, no en todos los grupos ha sucedido los mismo.

Además en general en las placas de petrio no se ha presentado un halo de inhibición ya que no se presentaban con abundancia las bacterias. Las colonias han crecido aisladas.

En la repetición se han sumergido más cepas por tal de observar mejor los resultados de esta prueba. Se ha hecho con las mismas colonias pero con más abundancia.

Para poder evaluar los resultados se debe de medir el diámetro que se a formado alrededor de cada antibiótico, hay que tener en cuenta;

• Novobiocina; si el diámetro es igual o superior a catorce milímetros, es sensible a este antibiótico y se escribe en la tabla el numero uno.

• Polimixines;si el diámetro es superior a catorce milímetros, es sensible a este antibiótico y se escribe en la tabla el numero dos.

• Deferoxamines; si el diámetro es igual o superior a nueve milímetros, es sensible a este antibiótico y en la tabla se escribe el numero tres.

(y si estas bacterias son resistentes se escribe en la tabla un cero)

Para poder calcular la resistencia de las bacterias se suman todos los números de un fila, el valor final es la resistencia que tiene una bacteria determinada.

En esta tabla se puede observar los resultados de repetición de esta prueba.

Placas de petrio	Novobiocina			Polimixines			Deferoxamina
	Diámetro	capacidad	num	Diámetro	capacidad	num	Diámetro	capacidad	num
S.Aureus (grupo I)	28mm	sensi-ble	1	13mm	Resistencia	0
S.Aureus (grupo II)	30mm	sensi-ble	1	40mm	sensi-ble	1
S.epidermidis (grupo I)	32mm	sensi-ble	1	30mm	sensi-ble	1
S.epidermidis (grupo II)	35mm	sensi-ble	1	35mm	sensi-ble	1
Muestra desconocida	19mm	sensi-ble	1	12mm	Resistencia	0

Taula 1: Resultados de la prueba

En los demás grupos ha salido aproximadamente lo mismo respecto a las medidas del diámetro que se ha formado en el halo inhibido de cada antibiótico, aunque en algún grupo han sido bastante diferentes los resultados ya que salían números muy pequeños lo cual podemos deducir que quizás no se ha seguido el mismo orden para desarrollar esta práctica o no habían las cepas suficientes para poder desarrollar el trabajo.

Placas de petrio	Suma de los números	Total
S.Aureus (grupo I)	1+0+0	1
S.Aureus (grupo II)	1+2+0	3
S.epidermidis (grupo I)	1+2+0	3
S.epidermidis (grupo II)	1+2+0	3
Muestra desconocida	1+0+0	1

Taula 2: Valor final de los resultados

Discusión y Conclusión

Novobiocina es uno de los antibióticos respecto a los otros dos antibióticos presenta un tamaño más grande, aunque no tiene gran diferencia entre polimixines ya que hay una diferencia de unos escasos milímetros. Lo cual quiere decir que estas bacterias son sensibles a este antibiótico.

Todas estas especies que estan presente en el cuadro I Y II resisten al antibiótico Deroxina ya que alrededor del disco antibiótico no se ha formado la zona de inhibición y además pueden proliferar alrededor de este disco antibiótico.

El antibiótico Polimixina es resistente, aunque en estas muestras aparece que este antibiótico sea sensible a estas especies, ya que en una muestra se presenta un diámetro de cuarenta milímetros, lo cual quiere decir que este antibiótico es muy sensible al S.aures. Aún y asín se sabe que esto es bastante extraño que suceda, puede ser diferentes causas.

Se puede observar en la muestra del tomate, sospechosa a tener microorganismos procedentes de S.aureus., se puede observar que en esta muestra salen más o menos unos resultados adecuados esperados respecto al antibiótico Polimixina ya que tiene un diámetro inferior a catorce milímetros lo cual quiere decir que estas especies sospechosas a ser Staphylococcus son resistentes al antibiótico Polimixina.

Confirmación de la presencia de S.aureus en los alimentos

Anam Arif

Práctica 2 (4rta parte)

Confirmación de la presencia de

S.aureus en los alimentos

Objetivo

Determinar la presencia o ausencia de S.aureus en la muestra de los alimentos.

Introducción

• El medio de cultivo Giolitti – Cantoni (GC)es un caldo de enriquecimiento utilizado para seleccionar y favorecer el aislamiento de S.aureus a partir de alimentos.

Este medio contiene tripteína, extracto de carne y extracto de levadura, constituye la base para el desarrollo de los microorganismos. El piruvato de sodio y el manitol son estimulantes del desarrollo del estafilococos y inhibe el crecimiento de los bacilos Gram negativo fermentadores de la lactosa, mientras que otras bacterias Gram positivas son inhibidas por el telurito y la glicina . Además se cubre la superficie del medio inoculando con una capa de parafina estéril, y de este modo s e evita el crecimiento de los micrococos.

La presencia de S.aureus se manifiesta por el ennegrecimiento del medio de cultivo en el fondo del tubo, ya la reacción se ha reducido de telurito a telurio.

• El medio de cultivo Baird-Parker (BP) es un medio sólido, selectivo y diferencial para el aislamiento y recuento de estafilococos coagulasa positiva en alimentos. Y da una reacción sobre la yema de huevo produciendo una zona opaca, y como que el S. aureus que produce lipasa que actuá sobre la sobre una lipoproteina de la yema del huevo.

Material

• Placas de petrio

• Pipetas automáticas

• HCl (ácido clorhídrico)

• Medio de cultivo Baird-Parker (BP)

• Medio de cultivo Giolitti Cantoni (GC)

• Medio de cultivo agua de peptona tamponada (APT)

• Nansa de Kolle

• Nansa de Drigralsky

• Baño termoestatico

• Stomacher

• Bolsas de stomacher

• Autoclave

• Placa calefactora y agitadora

• Termómetro

• Pipetas Pasteur

• Erlenmeyer

Procedimiento

• Preenriquicimiento

Este proceso ya esta realizado, y las muestras están guardadas en la nevera.

Se cogen diez gramos de tomate y se introducen en la bolsa de stomacher y se añade noventa mililitros del medio de cultivo APT. Y se homogeneiza durante un minuto en el stomacher y esta dilución se considera de una concentración de 10^-1.

Se prepara un banco de dilución hasta una concentración de 10^-2.

• Enrequicimineto

Sembrar un mililitro en cada una de la diluciones en cada tubo con el caldo de de GC no se le ha puesto en la tapa vaselina, por lo tanto el trabajo no se hará en condiciones anóxicas. Y este tubo se incuba durante un par de días a treinta y siete grados.

El resultado da positivo si en el fondo del tubo hay teluro. Es decir el tubo cambia de color verde oscuro a negro. Pero en este caso no será asín ya que el medio esta caducado, y estos tubos son de color amarillo se han degradado. Este proceso no se ha hecho en un ambiente anaeroxico.

• Tubo 1 (S.aureus) = +

• tubo 2 (S.epidermidis) = -

En el tubo 2 que ha dado negativo no ha habido ningún tipo de cambio.

• Aislamiento

Se suspende sesenta gramos del medio deshidratado en novecientos cuarenta mililitros de agua destilada. Se deja durante cinco minutos en reposo. Y se calienta y se agita durante un minuto. Se esteriliza en el autoclave durante un cuarto de hora a a ciento veintiún grados, se enfriá a temperatura ambiente. Y finalmente se añade yema de huevo y telurito de potasio.

El tubo 1 que ha dado sospechosamente positivo se resembrara una estría por agotamiento en la placa de petrio con el medio de cultivo de BP,

Y se resiembran otras cepas que son sospesas a se estafilococos aureus;

• S.auerus = +

• S.epidermidis = -

• MSA tomate = -

Y estas placas se incuban a treinta y siete grados durante un día.

• Confirmación

Las colonias crecidas en el medio de cultivo BP, por tal de confirmar la presencia de estafilococos aureus enterotoxigenico se siembran estas cepas en una placa de petrio con el medio de cultivo DNassa para hacer la prueba de desoxirribonucleasa. Y estas placas se sembran durante una día a treinta y siete grados.

Después de la incubación se introduce ácido clorhídrico (HCl), y este ácido precipita el fragmento de DNassa y por este motivo se froma un halo al rededor del bacterio

• S.auerus = +

• S.epidermidis = -

• MSA tomate = -

• MSA mucosas nasales = +

Resultados

Los tubos del medio de cultivo GC que se había sembrado cepas puras procedentes del medio de cultivo AS, ha dado sospechosamente positivo, ya que el tubo ha cambiado de color amarillo a verde oscuro (el medio de cultivo esta caducado) en el fondo del tubo hay una sustancia negra. Además esta muestra no se ha hecho en condiciones anaeroxicas ya que no se ha introducido vaselina en la tapa del tubo.

Al homogeneizar el alimento (tomate) en la bolsa de stomacher con el medio de cultivo la estructura se uniforma, es decir que el medio sólido (tomate) y el medio líquido (medio de cultivo APT) se disuelven.

El piruvato de sodio y el manitol son estimulantes del desarrollo de estafilococos y ayudan a la detección de estos microorganismos, en pequeñas cantidades (estas sustancias están presentes en el medio de cultivo GC).

El cloruro de litio inhibe el crecimiento de bacilos Gram negativo fermentadores de lactosa , mientras que los bacilos Gram positivos son inhibidas por el telurito y la glicina.

El medio de cultivo que se ha sembrado en el tubo (medio GC) en teoría el medio debería de pasar de color verde oscuro a negro, ya que se ennegrece por transformación de telurito a teluro. Pero como estas muestras estaban caducadas, inicialmente se encontraba de color amrillo y posteriormente se cambio de color verde oscuro.

Las colonias crecidas de S.aureus sobre el medio de cultivo BP tienen una apariencia;

• Colonias negras con borde incoloro

• Convexas, rodeadas de una zona opaca

• Y una zona clara externa.

Discusión y Conclusión

Las placas de petrio con medio de cultivo BP que se habían resembrado microorganismos de otros medios es muy importante no dejar más de veinticuatro horas las placas ya que hay que hacer la lectura de estas placas y el resultado podría ser distinto al inicial, ya que proliferan más bacterias.

Para poder realizar el trabajo de Giolitti-Cantoni adecuadamente la tapa de los tubos debe de contener baselina, ya que esta sustancia crea unas condiciones anóxicas (ausencia de oxigeno).

La yema del huevo contiene una lipoproteina, y produce un halo y ha consecuencia se forman se forma Ca (calcio) y Mg (magnesio).

Para poder determinar le presencia de esta especie estafilococos aureus es muy importante que de positivo en todos los procedimientos con que en un método el resultado de negativo ya no se puede decir que ese alimento tiene esta especie.

Bibliografia

http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/bairdparker.htm

http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/giolitticantmedio.htm

Apunts de classe

Confirmación de la presencia de S.aureus en los alimentos

Anam Arif

Práctica 2 (4rta parte)

Confirmación de la presencia de

S.aureus en los alimentos

Objetivo

Determinar la presencia o ausencia de S.aureus en la muestra de los alimentos.

Introducción

• El medio de cultivo Giolitti – Cantoni (GC)es un caldo de enriquecimiento utilizado para seleccionar y favorecer el aislamiento de S.aureus a partir de alimentos.

Este medio contiene tripteína, extracto de carne y extracto de levadura, constituye la base para el desarrollo de los microorganismos. El piruvato de sodio y el manitol son estimulantes del desarrollo del estafilococos y inhibe el crecimiento de los bacilos Gram negativo fermentadores de la lactosa, mientras que otras bacterias Gram positivas son inhibidas por el telurito y la glicina . Además se cubre la superficie del medio inoculando con una capa de parafina estéril, y de este modo s e evita el crecimiento de los micrococos.

La presencia de S.aureus se manifiesta por el ennegrecimiento del medio de cultivo en el fondo del tubo, ya la reacción se ha reducido de telurito a telurio.

• El medio de cultivo Baird-Parker (BP) es un medio sólido, selectivo y diferencial para el aislamiento y recuento de estafilococos coagulasa positiva en alimentos. Y da una reacción sobre la yema de huevo produciendo una zona opaca, y como que el S. aureus que produce lipasa que actuá sobre la sobre una lipoproteina de la yema del huevo.

Material

• Placas de petrio

• Pipetas automáticas

• HCl (ácido clorhídrico)

• Medio de cultivo Baird-Parker (BP)

• Medio de cultivo Giolitti Cantoni (GC)

• Medio de cultivo agua de peptona tamponada (APT)

• Nansa de Kolle

• Nansa de Drigralsky

• Baño termoestatico

• Stomacher

• Bolsas de stomacher

• Autoclave

• Placa calefactora y agitadora

• Termómetro

• Pipetas Pasteur

• Erlenmeyer

Procedimiento

• Preenriquicimiento

Este proceso ya esta realizado, y las muestras están guardadas en la nevera.

Se cogen diez gramos de tomate y se introducen en la bolsa de stomacher y se añade noventa mililitros del medio de cultivo APT. Y se homogeneiza durante un minuto en el stomacher y esta dilución se considera de una concentración de 10^-1.

Se prepara un banco de dilución hasta una concentración de 10^-2.

• Enrequicimineto

Sembrar un mililitro en cada una de la diluciones en cada tubo con el caldo de de GC no se le ha puesto en la tapa vaselina, por lo tanto el trabajo no se hará en condiciones anóxicas. Y este tubo se incuba durante un par de días a treinta y siete grados.

El resultado da positivo si en el fondo del tubo hay teluro. Es decir el tubo cambia de color verde oscuro a negro. Pero en este caso no será asín ya que el medio esta caducado, y estos tubos son de color amarillo se han degradado. Este proceso no se ha hecho en un ambiente anaeroxico.

• Tubo 1 (S.aureus) = +

• tubo 2 (S.epidermidis) = -

En el tubo 2 que ha dado negativo no ha habido ningún tipo de cambio.

• Aislamiento

Se suspende sesenta gramos del medio deshidratado en novecientos cuarenta mililitros de agua destilada. Se deja durante cinco minutos en reposo. Y se calienta y se agita durante un minuto. Se esteriliza en el autoclave durante un cuarto de hora a a ciento veintiún grados, se enfriá a temperatura ambiente. Y finalmente se añade yema de huevo y telurito de potasio.

El tubo 1 que ha dado sospechosamente positivo se resembrara una estría por agotamiento en la placa de petrio con el medio de cultivo de BP,

Y se resiembran otras cepas que son sospesas a se estafilococos aureus;

• S.auerus = +

• S.epidermidis = -

• MSA tomate = -

Y estas placas se incuban a treinta y siete grados durante un día.

• Confirmación

Las colonias crecidas en el medio de cultivo BP, por tal de confirmar la presencia de estafilococos aureus enterotoxigenico se siembran estas cepas en una placa de petrio con el medio de cultivo DNassa para hacer la prueba de desoxirribonucleasa. Y estas placas se sembran durante una día a treinta y siete grados.

Después de la incubación se introduce ácido clorhídrico (HCl), y este ácido precipita el fragmento de DNassa y por este motivo se froma un halo al rededor del bacterio

• S.auerus = +

• S.epidermidis = -

• MSA tomate = -

• MSA mucosas nasales = +

Resultados

Los tubos del medio de cultivo GC que se había sembrado cepas puras procedentes del medio de cultivo AS, ha dado sospechosamente positivo, ya que el tubo ha cambiado de color amarillo a verde oscuro (el medio de cultivo esta caducado) en el fondo del tubo hay una sustancia negra. Además esta muestra no se ha hecho en condiciones anaeroxicas ya que no se ha introducido vaselina en la tapa del tubo.

Al homogeneizar el alimento (tomate) en la bolsa de stomacher con el medio de cultivo la estructura se uniforma, es decir que el medio sólido (tomate) y el medio líquido (medio de cultivo APT) se disuelven.

El piruvato de sodio y el manitol son estimulantes del desarrollo de estafilococos y ayudan a la detección de estos microorganismos, en pequeñas cantidades (estas sustancias están presentes en el medio de cultivo GC).

El cloruro de litio inhibe el crecimiento de bacilos Gram negativo fermentadores de lactosa , mientras que los bacilos Gram positivos son inhibidas por el telurito y la glicina.

El medio de cultivo que se ha sembrado en el tubo (medio GC) en teoría el medio debería de pasar de color verde oscuro a negro, ya que se ennegrece por transformación de telurito a teluro. Pero como estas muestras estaban caducadas, inicialmente se encontraba de color amrillo y posteriormente se cambio de color verde oscuro.

Las colonias crecidas de S.aureus sobre el medio de cultivo BP tienen una apariencia;

• Colonias negras con borde incoloro

• Convexas, rodeadas de una zona opaca

• Y una zona clara externa.

Discusión y Conclusión

Las placas de petrio con medio de cultivo BP que se habían resembrado microorganismos de otros medios es muy importante no dejar más de veinticuatro horas las placas ya que hay que hacer la lectura de estas placas y el resultado podría ser distinto al inicial, ya que proliferan más bacterias.

Para poder realizar el trabajo de Giolitti-Cantoni adecuadamente la tapa de los tubos debe de contener baselina, ya que esta sustancia crea unas condiciones anóxicas (ausencia de oxigeno).

La yema del huevo contiene una lipoproteina, y produce un halo y ha consecuencia se forman se forma Ca (calcio) y Mg (magnesio).

Para poder determinar le presencia de esta especie estafilococos aureus es muy importante que de positivo en todos los procedimientos con que en un método el resultado de negativo ya no se puede decir que ese alimento tiene esta especie.

Bibliografia

http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/bairdparker.htm

http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/giolitticantmedio.htm

Apunts de classe

Confirmación de la presencia de S.aureus en los alimentos

Práctica nº12 (tercera parte)

Confirmación de la presencia de S.aureus en los alimentos

Objetivo

Desarrollar la prueba de la coagulasa del plasma de aglutinación en un reactivo que contiene eritrocitos y partículas de látex.

Introducción

La prueba basada en la coagulación del plasma de conejo cuando la coagulasa extracelular excretada por la bacteria S.aureus prueba de la activación del fibrinogeno es muy lenta y requiere una incubación del sistema entre 4 – 24 horas, se han de desarrollar otros métodos en los que realiza la aglutinación de partículas de látex.

El reactivo que se incorporan eritrocitos de oveja que se aglutinan con la existencia de las cepas de S.aureus que tiene receptor del fribinogeno y también contiene partículas de látex sensibilizadas con anticuerpos monoclonales, que se presenta en la superficie y se aglutinan cuando entran en contacto con la cepa.

Material

• Reactivo slidex Staph-kit

• Bastoncillos desechables

• Medio de cultivo MSA con las colonias sospechosas de ser S.aureu

• Suporte de plástico

Procedimiento

• Prueba rápida de la coagulasa en látex

Se debe de sacar los reactivos de la nevera para que pueden estar a la temperatura ambiente, poner en suspensión los reactivos y eliminar las burbujas retenidas en el cuenta-gotas.

• Tarjeta rechazable

Colocar la tarjeta en vertical. En uno de los circulo invertir una gota del reactivo 1( látex anti – S.aureus) y en el segundo introducir una gota del reactivo 2 (látex control negativo).

Con la ayuda de la barrillas desechables introducir unas cuatro colonias (tamaño pequeño)sospechosas aisladas en el medio de cultivo MSA (tomate). Y diluir la tarjeta con un ligero movimiento durante unos quince segundos, teniendo en cuenta si se da un movimiento brusco puede salir el reactivo del circulo.

La interpretación de estos resultados

• Resultado positivo ;

R1 en treinta segundos (es el tiempo que tarda en el procedimiento) da una aglutinación.

R2 no aglutina.

• Resultado negativo;

R2 y R1falta de aglutinación.

Resultados

• Tarjeta rechazable 1

En esta tarjeta que se había introducido bacterias de S.aures, socas puras, y tal como se esperaba, y también se puede observar en está imagen(la segunda tarjeta ) se observa que el color del reactivo es más claro, ya que a habido una unión de diferentes componentes (R1) ya que este látex esta sensibilizado mediante el fibrinógeno y anticuerpos.

Pero en el R2 no se ha podido observar ningún tipo de aglutinación con la cepa (ya que el látex se utiliza para control negativo, contiene nitrato sódico ).

• Tarjeta rechazable 2

En esta tarjeta se había introducido bacterias de S.epidermis, socas puras, como se observa en la imagen, tanto como el R1 y R2 no se ha producido nada

Discusión y Conclusión

Para que una bacteria pueda coagule en el reactivo, este reactivo debe de contener una proteína del plasma de conejo ( fibrinogeno ) que se convierte en fibrina durante en el procesó de coagulación en cambio si el reactivo tiene nitrato de sódico menos del cero coma uno por ciento de concentración lo cual hace que no se desarrollé el proceso de la coagulación.

Introducir más de una colonia de un tamaño pequeño o tan solo una grande, ya que se siembran colonias sospechosas, que puede que no se han bacterias que coagulen.

Hacer un mal movimiento con la ayuda de la barrilla desechable, puede tener consecuencias equivocas, ya que la concentración del reactivo puede salir de la circunferencia puede ser que los resultados no salgan tal y como se esperaba ya puede variar la concentración.

Bibliografia

• Apuntes de clase