1.Objectiu
En aquesta tercera pràctica tenien que aprendre a preparar un medi de cultiu (TSA, AN)
prosseguir la barreja hologènica( és un nivell molecular de més de dues espècies químiques que no reaccionen entre si) format per un solut i un dissolvent( en l'aigua salada el solut és la sal i el dissolvent és l'aigua destil·lada, i el conjunt és la dissolució).
Desprès s'ha de tenir en conté que desprès de la barreja homogènica s'ha de introduir-ho a l'autoclau.
2.Introducció
La dissolució és realitza a partir del solut què és un medi de cultiu, és un substrat de nutrients, on els microorganismes creixen i és multipliquen, per tal de poder aïllar les diferents espècies bacterianes, per poguer identificar-les i fer estudis complementaris. El medi de cultiu que han utilitzat en el laboratori de microbiologia són els següents (TSA, AN). Desprès han de barrejar el solut i la dissolució amb l'escalfador-agitador (és un instrument que dilueix el solut i el dissolvent fins caldejar-ho). Això fa que la dissolució es barregi adequadament i s'escalfi bé.
Posteriorment s'introdueix a l'autoclau, per a esterilitzar tots els microorganismes, al cap d'una estona quan l'autoclau hagi finalitzat el seu treball han de esperar que baixi la temperatura i la pressió, un cop obert la tapa de l'autoclau és retira la ampolla de pirex i la fitxa tècnica, per comprovar si s'ha esterilitzat del tot el medi.
Un cop que la ampolla de pirex haguí arribat a la temperatura atmosfèrica el guardaran al congelador, no és pot introduir abans ja que sí no és espatllaran la resta dels productes que hi han en el congelador.
3.Material
Medi de cultiu TSA, AN
Espàtula
Vas de precipitats
Ampolla de pire
Balança analítica
Vidre de rellotge
Cinta adhesiva d'esterilització
Aigua destil·lada
Autoclau
pH-metre
Barilla de vidre
4.Procediement
Elaboraran un medi de cultiu pesant en la balança analítica la massa de medi de cultiu indicada en la etiqueta del producte. Per poguer pesar la massa haure'n de calcular a partir de 50ml;
50ml x 1l x 40g =2g
1000ml 1l
Un cop pesat el solut en la balança analítica, però no directament, a sobre del vidre de rellotge, sense passar-s`hen amb l'excés de la massa ja que sinó és poden espatllar els motlles de la balança, seguidament amb la ajuda de l'espàtula poseràn el solut en el vas de precipitat de 250ml, prèviament no fa falta esterilitzar-ho ja que desprès al afegir-ho a l'autoclau és eliminaran tot tipus de microorganismes danyin, i el posaran a sobre de l'escalfador- agitador alhora de posar-ho a sobre se'l introduirà un imant per a què la dissolució és escalfi i alhora és barregi, fins a què la dissolució comenci a bulli el sistema estigui homogeni.
Seguidament és introdueix el sistema homogeni a la ampolla de pirex amb l'ajuda de barilla de vidre.
Llavors la ampolla de pirex s'ha d'esterilitzar en l'autoclau el primer pas és observar si les aixetes de aigua i el de vapor d'aigua estan tancades ja què sinó no podrà arribar a la temperatura i pressió adequada, i comprovar que l'aigua arrasi fins l'indicador. Llavors dipositaran les ampolles de pirex, sobretot no és pot tancar la rosca del tot ja què sinó no separa les molecúles per a esterilitzar a través del vapor d'aigua, a l'autoclau adjunta'n amb la fitxa tècnica a on és possaràn la cinta indicadora d'Esterilització en diferents llocs per a comprovar què tots els punts s'hagin esterilitzat a més s'ha de posar;
L`hora; 18:3
Cicle; dietètica
Operaciò; esterilització
Observació
també s`ha d`indicar a l`amplla de pirex amb un rotulador el dia d`esterilització
Finalment és pot tancar amb la tapa, i prement a inici s'encén l'indicador al acabar s'encén l'indicador de finalitzat acomodat amb uns so molt molest, però no és pot obrir la tapa ni les vàlvules, ja que sinó es espatllarien els conductes per a on passaren l'aigua i el vapor d'aigua, tindran que mantenir amb la tapa tancada fins que s'hagin reduint la pressió i la temperatura. Al treure la amolla de pirex el primer de tot s`ha de comprovar sí s`ha esterilitzat el sistema homogeni observant la fitxa tècnica si la cinta indicadora a passat a tenir unes ratlles negres, això vol dir què el sistema homogeni s'ha esterilitzat.
Al cap d'una estona quan la dissolució estigui a la temperatura ambient és guarden a la nevera amb la data de caducitat , que depèn del tipus de medi, què sol ser d'uns 2 a 4 mesos.
5.Resultats
Necessiten 2 grams de medi de cultiu per poguer preparar la dissolució.
A d'estar a 121 C durant una hora per a aconseguir en l'interior de l'autoclau.
Un cop finalitzat el procés d'esterilització adopta unes línies negres a la cinta indicadora d'esterilització.
La reixeta és el material que s'utilitzà per a poguer tapar la part de endins d'autoclau.
El vapor d'aigua és un gas que es forma endins de l'autoclau a més és el responsable d'esterilització del sistema homogeni.
La desinfecció és un procés d'eliminació de gèrmens nocius d'un medi què poden estar acompanyats en el medi.
L'Esterilització és un mètode què consisteix a destruir els microorganismes bacteris, fongs... en un espai determinat.
La rosca de la ampolla de pirex a d'estar mig obert per a què el medi intern assoleixi la temperatura adequada de l'autoclau.
La calor humida és el responsable d'aquest tipus d'esterilització què és pràctica en l'autoclau.
La soja de triptona
Medi d´ús general per al cultiu de tot tipus de micrioorganismes.
Composició(g/L)
Peptona de soja 5,0
Peptona de caseina 15,0
Sodio de cloruro 5,0
Agar 15,0
pH 7,3 +- 0,2
Preparació
Suspendre 40g en 1L d`aigua destil·lada.
Escalfar i bullir durant un minut.
Esterililtzar a 121C durant 15 min i distribuir a les plaques de petri.
Nutritiu agar(medi deshidratat)
Medi recomant per el cultiu de gran varietat de bacteris i per el recompte dels microorganismes en H2O2 i altres materials
Composició
Extracto de carne 3,0
Peptona de gelatina 5,0
Agar 15,0
pH 6,8 +- 0,2
Preparació
Suspendre 23g en un litre d`aigua destil·lada.
Escalfar agitar fins què la ebullicio i la dissoluciò total.
Bullir durant un minut.
Esterililtzar a 121C durant 15 min.
El pH-metre s'ha de calibrar amb el patró, a més han de tenir en compte què la calibració és fa cada dia, és essencial tenir-ne dos com a mínim però hi han tres tipus de patró; àcid, neutre i finalment un de bàsic.
Aquestes solucions s'anomenen solució tampó, s` amortiguan la solució, és molt importat reservar-ho en el congelador, ja què sinó és pot espatllar.
Espàtula per un canto té una forma aplanada i l'altre cantó està ovalat (com la forma d'una cullera) és una eina què s'utilitza per a recollir un material sòlid.
Vas precipitat és un instrument graduat de forma cilíndrica que serveix per mesurar el volum del dissolvent.
Balança analítica aparell què s'utilitzà per a pesar la massa d'un cos, però mai és pot pesar una massa què pessi més de un pes determinat.
Vidre de rellotge té una forma cilíndrica i ovalada que s'utilitzà per a posar una massa sòlida.
Cinta adhesiva indicadora d'esterilització és una tira a on és comprova què quan el procés s'ha finalitzat s'ha esterilitzat o no, sí té unes ratlles de color negre vol dir què sistema s'ha esterilitzat correctament.
Autoclau és un instrument per a eliminar tot tipus de microorganismes que poden haver-hi en el medi
Ampolla de pirex és un instrument a on és posa la dissolució i posteriorment és fica endins de l'autoclau.
Barilla de vidre és una eina què s'utilitzà per remoure el medi.
Escalfador-agitador instrument què s'utilitzà per a escalfar i remoure la dissolució.
6.Discussió
Han de tenir en compte què els medis de cultiu no és poden barrejar ja què sinó no tindrà ningún tipus d`eficacia, s`han de possar en dos ampolles de pirex diferent diferentcian-lo clarament què són dos medis desiiguals.
Sobretot han de tenir en compte de no barrejar els diferents patrons ja què tene un pH diferent és poden espatllar els patrons.
7.Conclusions
Per a poguer fer un medi de cultiu han de tenir en compte que hi ha diferents tipus de medi i mai és poden barrejar, ja què sinó perd la seva eficàcia, per saber quants grams de solut és necessita per preparar una dissolució s'ha de observar en l'etiqueta i desprès fer una regla de tres per a saber quants grams de solut és necessiten en un dissolvent de 50ml , quan és fa la barreja hologènica el total de la dissolució és de 250ml.
Un cop calculat el solut s'ha de mesurar a la balança analítica i introduir-ho en un vas de precipitat per a poguer homogeneïtzar i escalfar en el escalfador-agitador.
Seguidament s'introdueix a la ampolla de pirex per posar-ho a l'autoclau, prèviament s'ha d'observar sí n'hi ha aigua destil.lada arrasant fins l'indicador, posaran la reixeta i a sobre les ampolles adjunta'n amb la fitxa tècnica per a poguer comprovar si s'ha esterilitzat tot el sistema homogeni.
