Confirmación de la presencia de S.aureus en los alimentos

Práctica nº12 (tercera parte)

Confirmación de la presencia de S.aureus en los alimentos

Objetivo

Desarrollar la prueba de la coagulasa del plasma de aglutinación en un reactivo que contiene eritrocitos y partículas de látex.

Introducción

La prueba basada en la coagulación del plasma de conejo cuando la coagulasa extracelular excretada por la bacteria S.aureus prueba de la activación del fibrinogeno es muy lenta y requiere una incubación del sistema entre 4 – 24 horas, se han de desarrollar otros métodos en los que realiza la aglutinación de partículas de látex.

El reactivo que se incorporan eritrocitos de oveja que se aglutinan con la existencia de las cepas de S.aureus que tiene receptor del fribinogeno y también contiene partículas de látex sensibilizadas con anticuerpos monoclonales, que se presenta en la superficie y se aglutinan cuando entran en contacto con la cepa.

Material

• Reactivo slidex Staph-kit

• Bastoncillos desechables

• Medio de cultivo MSA con las colonias sospechosas de ser S.aureu

• Suporte de plástico

Procedimiento

• Prueba rápida de la coagulasa en látex

Se debe de sacar los reactivos de la nevera para que pueden estar a la temperatura ambiente, poner en suspensión los reactivos y eliminar las burbujas retenidas en el cuenta-gotas.

• Tarjeta rechazable

Colocar la tarjeta en vertical. En uno de los circulo invertir una gota del reactivo 1( látex anti – S.aureus) y en el segundo introducir una gota del reactivo 2 (látex control negativo).

Con la ayuda de la barrillas desechables introducir unas cuatro colonias (tamaño pequeño)sospechosas aisladas en el medio de cultivo MSA (tomate). Y diluir la tarjeta con un ligero movimiento durante unos quince segundos, teniendo en cuenta si se da un movimiento brusco puede salir el reactivo del circulo.

La interpretación de estos resultados

• Resultado positivo ;

R1 en treinta segundos (es el tiempo que tarda en el procedimiento) da una aglutinación.

R2 no aglutina.

• Resultado negativo;

R2 y R1falta de aglutinación.

Resultados

• Tarjeta rechazable 1

En esta tarjeta que se había introducido bacterias de S.aures, socas puras, y tal como se esperaba, y también se puede observar en está imagen(la segunda tarjeta ) se observa que el color del reactivo es más claro, ya que a habido una unión de diferentes componentes (R1) ya que este látex esta sensibilizado mediante el fibrinógeno y anticuerpos.

Pero en el R2 no se ha podido observar ningún tipo de aglutinación con la cepa (ya que el látex se utiliza para control negativo, contiene nitrato sódico ).

• Tarjeta rechazable 2

En esta tarjeta se había introducido bacterias de S.epidermis, socas puras, como se observa en la imagen, tanto como el R1 y R2 no se ha producido nada

Discusión y Conclusión

Para que una bacteria pueda coagule en el reactivo, este reactivo debe de contener una proteína del plasma de conejo ( fibrinogeno ) que se convierte en fibrina durante en el procesó de coagulación en cambio si el reactivo tiene nitrato de sódico menos del cero coma uno por ciento de concentración lo cual hace que no se desarrollé el proceso de la coagulación.

Introducir más de una colonia de un tamaño pequeño o tan solo una grande, ya que se siembran colonias sospechosas, que puede que no se han bacterias que coagulen.

Hacer un mal movimiento con la ayuda de la barrilla desechable, puede tener consecuencias equivocas, ya que la concentración del reactivo puede salir de la circunferencia puede ser que los resultados no salgan tal y como se esperaba ya puede variar la concentración.

Bibliografia

• Apuntes de clase