Confirmación de la presencia de S.aures en los alimentos

Práctica nº 12 (5nta parte)

Confirmación de la presencia de

S.aures en los alimentos

Objetivo

A partir de tres antibióticos (Novobiocina, Polimixines, Deferoxamines) determinar la sensibilidad que tienen las dos especies de S.aureus y S.epidermis. Que se observa a partir del diámetro que se forma alrededor del antibiótico.

Introducción

El sistema antimicrobiano es uno de los métodos que se utiliza para confirmar la asistencia de la especie de S.aureus en los alimentos.

Los principales antibióticos que se utilizan en el sistema anitmicrobiano son los siguientes;

• Deferoxamina es un agente quelante de hierro.

• Novobiocina es activa en frente S.epidermidis. Inhibe el crecimiento de especies Proteus

• Polimixines es un polipeptido producido por una cepa llamada Bacillus polymixa. Su actividad se limita a las bacterias gram negativas.

Son modelos de sensibilidad natural en agar de las bacterias a estos antibióticos que se valoran incubando los durante veinticuatro horas. Después del periodo prolongado se forma un halo de inhibición, y cada antibiótico tendrá un diámetro distinto ya que no afecta con la misma intensidad tres distintos antibióticos a una especie.

Material

• Deferoxamina (250µg )

• Novobiocina (5µg )

• Polimixines (150µg )

• Placas de petrio

• Hisopo

• Tubo de plástico

• Agua salina fisiologica

• Cultivos puros de S.epidermidis y S.aureus

• Nansa de kolle

• Bec Bunsen

• Alcohol

• Vórtex

• Regla

• Pinzas

Procedimiento

En un tubo de plástico estéril se introducen cinco mililitros de agua fisiológica salina de una concentración de cero coma nueve por ciento, después con la ayuda de una nansa se agregan cepas.

• Tubo uno

Primero se esteriliza la nansa de Rolle con la ayuda del Bec Bunse, una vez desinfectado este instrumento se cogen cepas puras de S.epidermidis dos o tres o más (si tienen un diámetro pequeño) y se homogeneiza con la ayuda del vòrtex durante treinta segundos.

Luego con un hisopo estéril se sumerge en el tubo de plástico estéril homogeneizado y se hacen unas estriás encima de la placa de petrio.

Se coge una pinza y se esteriliza primeramente con alcohol y posteriormente con Bec Bunsen, (es preferible hacer esta práctica en el flujo laminar ya que sino se puede contaminar todo el trabajo) se coge un antibiótico y se introduce en el medio de cultivo y asín con los otros dos antibióticos en diferentes puntos de este diámetro, dejando un espacio para no confundirse después del periodo de incubación.

• Tubo dos

Se hace el mismo método pero en este tubo se sumergirán cepas puras de S.aureus. Una vez homogeneizado el tubo de plástico se baña el hisopo y se hace una estriá en la placa de petrio.

Las pinzas deben de estar estériles ya que si no todo el pote de antibióticos se contaminaría, y poner los tres antibióticos en tres puntos distintos del medio.

• Tubo tres

Con la misma técnica se coge una nansa de Kolle esterilizada un la disolución fisiológica salina de cero como cinco mililitros y se introduce socas sospechosas a S.aureus procedentes del medio de cultivo Baird Parker (BP y se homogeneiza en el vórtex durante treinta segundos. ). Y con un hisopo estéril se introduce en el tubo de plástico y se hacen estrías en la placa de petrio.

Con una pinza estéril se cogen un antibiótico y se deja en un punto de esta circunferencia y de esta modo se hace con los demás antibióticos.

• Incubación

Se incuban durante un día a treinta y siete grados.

Para que posteriormente se puedan leer los resultados.

El día siguiente se ha vuelto ha hacer la misma práctica ya que no a salido lo que se esperaba des de un principio (no habían suficientes socas para que se desarrollen) y está vez se han introducido más colonias, que en las anteriores prácticas.

Resultados

Después del periodo de incubación, se examinan las placas de petrio.

Se puede observar en algunas muestras que han crecido hongos y esta proliferación manifiesta la resistencia que tienen estos microorganismos respecto a estos antibióticos, no en todos los grupos ha sucedido los mismo.

Además en general en las placas de petrio no se ha presentado un halo de inhibición ya que no se presentaban con abundancia las bacterias. Las colonias han crecido aisladas.

En la repetición se han sumergido más cepas por tal de observar mejor los resultados de esta prueba. Se ha hecho con las mismas colonias pero con más abundancia.

Para poder evaluar los resultados se debe de medir el diámetro que se a formado alrededor de cada antibiótico, hay que tener en cuenta;

• Novobiocina; si el diámetro es igual o superior a catorce milímetros, es sensible a este antibiótico y se escribe en la tabla el numero uno.

• Polimixines;si el diámetro es superior a catorce milímetros, es sensible a este antibiótico y se escribe en la tabla el numero dos.

• Deferoxamines; si el diámetro es igual o superior a nueve milímetros, es sensible a este antibiótico y en la tabla se escribe el numero tres.

(y si estas bacterias son resistentes se escribe en la tabla un cero)

Para poder calcular la resistencia de las bacterias se suman todos los números de un fila, el valor final es la resistencia que tiene una bacteria determinada.

En esta tabla se puede observar los resultados de repetición de esta prueba.

Placas de petrio	Novobiocina			Polimixines			Deferoxamina
	Diámetro	capacidad	num	Diámetro	capacidad	num	Diámetro	capacidad	num
S.Aureus (grupo I)	28mm	sensi-ble	1	13mm	Resistencia	0
S.Aureus (grupo II)	30mm	sensi-ble	1	40mm	sensi-ble	1
S.epidermidis (grupo I)	32mm	sensi-ble	1	30mm	sensi-ble	1
S.epidermidis (grupo II)	35mm	sensi-ble	1	35mm	sensi-ble	1
Muestra desconocida	19mm	sensi-ble	1	12mm	Resistencia	0

Taula 1: Resultados de la prueba

En los demás grupos ha salido aproximadamente lo mismo respecto a las medidas del diámetro que se ha formado en el halo inhibido de cada antibiótico, aunque en algún grupo han sido bastante diferentes los resultados ya que salían números muy pequeños lo cual podemos deducir que quizás no se ha seguido el mismo orden para desarrollar esta práctica o no habían las cepas suficientes para poder desarrollar el trabajo.

Placas de petrio	Suma de los números	Total
S.Aureus (grupo I)	1+0+0	1
S.Aureus (grupo II)	1+2+0	3
S.epidermidis (grupo I)	1+2+0	3
S.epidermidis (grupo II)	1+2+0	3
Muestra desconocida	1+0+0	1

Taula 2: Valor final de los resultados

Discusión y Conclusión

Novobiocina es uno de los antibióticos respecto a los otros dos antibióticos presenta un tamaño más grande, aunque no tiene gran diferencia entre polimixines ya que hay una diferencia de unos escasos milímetros. Lo cual quiere decir que estas bacterias son sensibles a este antibiótico.

Todas estas especies que estan presente en el cuadro I Y II resisten al antibiótico Deroxina ya que alrededor del disco antibiótico no se ha formado la zona de inhibición y además pueden proliferar alrededor de este disco antibiótico.

El antibiótico Polimixina es resistente, aunque en estas muestras aparece que este antibiótico sea sensible a estas especies, ya que en una muestra se presenta un diámetro de cuarenta milímetros, lo cual quiere decir que este antibiótico es muy sensible al S.aures. Aún y asín se sabe que esto es bastante extraño que suceda, puede ser diferentes causas.

Se puede observar en la muestra del tomate, sospechosa a tener microorganismos procedentes de S.aureus., se puede observar que en esta muestra salen más o menos unos resultados adecuados esperados respecto al antibiótico Polimixina ya que tiene un diámetro inferior a catorce milímetros lo cual quiere decir que estas especies sospechosas a ser Staphylococcus son resistentes al antibiótico Polimixina.