Pràctica nº4
Objectiu
Han de traspassar el medi de cultiu què està en l'ampolla de pirex a la placa de petri esterilitzada.
Mostrejar una àrea del laboratori per a què desprès és pugui estendre en el medi de cultiu.
Introducció
Gràcies a la elaboració del medi de cultiu admetran el desenvolupament de microorganismes que aspiren a reconèixer en la mostra del producte, al distribuir al medi en la placa de petri esterilitzat, amb la mostra d'una superfície a partir d'una operació anomenada dosificació o emplecat.
Ha d'estar el medi en la incubadora fins què els microorganismes siguin viables.
El contagi d'una àrea de treball s'examinà per tal de precisar la categoria de l'esterilitat què hi ha en aquell medi.
Material
Medi de cultiu TSA o AN preparat
Hisop de cotó
pH-metre
Microones
Bany termostàtic
Campana de flux laminar
Estufa
Plaques de petri
Solució salina fisiològica
Full de paper
Regle graduat
Llapis
Tisores
Procediment
Per poder començar amb l'emplacat un medi de cultiu i fer el control microbiològic de la superfície han de tenir a la taula de treball tot el material què prèviament s'ha descrit abans què s'haurà d'emparar.
Per realitzar aquest treball s'ha de tenir molt en compte una serie de normes;
Rentar les mans
Minimitzar el risc de contaminació( tancant les finestres...)
Trauran el medi de cultiu de la nevera, què prèviament havien preparat en l'última pràctica, deixaran el medi de cultiu a temperatura ambient, uns deu minuts aproximadament. Posteriorment per a liquar el medi utilitzaran el microones per a fondre el medi sòlid. S'ha d'evitar realitzar-ho per a un període excessiu a de ser un interval molt curt aproximadament d'un a dos minuts, a la veda durant aquest proces s'ha d'anar comprovant l'estat de fusió parcial, observant-lo al contrallum prèviament tret del microones.
Un cop confirmat que el medi de cultiu esterilitzat està completament liquat el deixaran temperar, mantenint-lo a un estat inferior a la de seva fusió, a uns 47-+2ºC dins del bany termostàtic.
De m'entres tan dibuixaran en un full de paper una superfície de 100cm2 i desprès en altre quadrant més extern , tenint en compte què cada aresta ha de tenir una longitud de 10cm, un cop dibuixat, el retallaran amb unes tisores en la seva perifèria però buidada. El quadrant que han realitzat s'utilitzarà com un model per a realitzar el mostreig.
Desprès s'ha de mesurar el pH-metre del medi de cultiu liquat, però abans de mesurar s'ha de calibrar el pH-metre amb l'ajuda de la solució tampó al menys s'ha de comprovar amb dues solucions àcid, bàsic o neutre, tenint en compte què no és poden barrejar ja què si no és espatlla el patró. S'ha de netejar la sonda del pH-metre amb aigua destil·lada per a què l'agar és quedi enganxat.Abans de comprovar el pH del medi és necessari comprovar-ho en el pot del medi quin és el seu pH 7,2.
A l'interior de la campana de flux laminar, un cop en posat en marxa és col·loquen les plaques de petri estèril a la superfície del treball del flux laminar, posteriorment és preparen les plaques de petri amb la tapa lleugerament obrint-ho per tal de abocar el medi.
És dosifica manualment, en cada una de les plaques, abocant uns 20mL fins a arrasar la superfície, un cop afegit el medi de cultiu en la placa de petri deuran d'anar en compte de minimitzar encara més el risc de contaminació, ja què no esterilitzaran el medi. Desprès d'arrasar la placa de petri no s'ha de tapar fins que passi d'un estat liquid a sòlid no és generi més vapor d'aigua.
Un cop què estigui el medi sòlid és tapa amb la tapa, colcant-la a sobre d'un altre què estigui buida amb la part contenidor en la part inferior. La columna de placa de petri es permet que vagi creixent tot i així han de tenir en compte que cal garantir que no posin en perill la seva estabilitat, passa quan n'hi ha deu o més apilades.
Hi s'ha de deixar que el medi de cultiu és solidifiqui. Posteriorment s'ha de escriure amb un marcador a sobre de la plac de petri el que cadascun a preparat amb la data nom i un numero de l'un al dotze, que correspon a l'ordre en que ho han emplacat el medi de cultiu.
Al cap d'una estona quan el medi estigui solidificat, ja es podra sembra passos a seguir;
Obrir el precinte de l'hisop (estèril),han d'annar amb alerta de no contaminar la torunda de cotó de l'extrem de l'hisóp evitant que toqui cap superfície.
Humitejar amb el medi de cultiu TSAque han dosificat en la placa de petri, el cotó terminal de l'hisop per a què d'auesta manera es facilitarà la captació dels microorganismes de la superfície que es mostregi
Amb la mostra de la superfície escollida delimitada pel marc de paper faran un escombrat amb l'extrem dels cotóns de l'hisop humitejat
Sembra la placa de petri realitzant un moviment en zig-zag per tota la superfície del medi de cultiu
S'incuba a l'estufa (amb una temperatura de 37ºC la placa de petri que han sembrat sobretot tenint en compte que el medi ha de estar avall.
Resultat
Una de la superfície què van emplacar va ser el teclat d'un ordinador del laboratori de microobiològia.
En aquesta placa de petri podem observar estropilooccocus averius( perquè són de color blanc).
Per enumerar els fongs és aconsellable no obrir la tapa de la placa de petri, ja què pot contenir fongs hi és perjudicial tenir en contacte.
En aquest medi poden observar fongs de color gorc, amb dieferents tipus de tamany, hi ha n fongs què és poden observar a ull nú, però d'altres què és necessari l'utilització de la lupa binocular.
Podem observar 16 fongs de color groc d'un tamany més o menys mitjà 3mm.
16Colònies = 0'16ufc/cm2
100cm2 mostrejats
Per cada 100cm2 de la mostra delimitada pel qudrant del paper, podem observar 0,16ufc/cm2.
També hi han unes 20 colonies de color blanc d'un tamany més petit que l'anterior d'uns 2mm.
20 Colònies = 0.2ufc/cm2
100cm2 mostrejats
Per cada 100cm2 de la mostra delimitada pel qudrant del paper, podem observar 0,2ufc/cm2.
Per últim hi ha 8 colònies d'un color groguenc, encara què sembla que sigui de color taronja, però al estar a sota del medi de cultiu s'han barrejat una mica els colors.
8Colònies = 0,8ufc/cm2
100cm2mostrejats
Per cada 100cm2 de la mostra delimitada pel qudrant del paper, podem observar 0,8ufc/cm2.
Una de la superfície què van emplacar va ser unes mans netes d'un company de classe de microobiologia.
En aquest mostreig podien observar una colònia gran de color blanc.
Per cada 100cm2 de la mostra delimitada pel qudrant del paper, podem observar 0,1ufc/cm2.
També n'hi han 75 colònies d'un tamany mitjà de color groc . Per tant de cada 100cm2 de la mostra delimitada pel qudrant del paper, podem observar 0,75ufc/cm2.
Hi la resta de les colònies tenen una mida milimètrica, hi han aproximadament 115 colònies. Què de cada 100cm2 de la mostra delimitada pel qudrant del paper, podem observar 0,115ufc/cm2.
Discusisó
L'estat del medi de cultiu què és troba quan és treu de la nevera és un esta sòlid, hi el tipus de medi de cultiu què van utilitzar per preparar el medi era TSA, és va preparar una setmana abans amb aigua destil·lada i el medi fins ha homogeneïtzar-ho i posteriorment és va ficar al autoclau.
Per considerar que efectivament la campana de flux laminar està perfectament en funcionament, s'ha de comprovar si els botons està en on.
Les plaques de petri han d'estar cap aval en l'interior de l'estufa d'incubació ja què és troben a un estat líquid hi és pot derramar ja que està arrasat la placa de petri.
Han de sembrar a sobre del medi de cultiu ja que sinó no podrien créixer els microorganismes.
No és aconsellable apilar més deu plaques de petri ja què posa en perill la seva estabilitat.
Un hisotop s'utilitza per a superfícies planes i còncaves.
Un medi de cultiu preparat poden estar en una ampolla de pirex durant setmanes dintre de la nevera , però dins d'una placa de petri sinó volen què apareixien diferents tipus de colònies és aconsellable no guardar-ho més de quatre dies.
Sí hagués donat el cas de que el medi de cultiu què han preparat el seu pH no hagués sigut el mateix de la què indica, és tornaria de fer de nou ja què aquell medi està malbé.
En aquest cas el mostreig que van fer en teclat de l'ordinador i d'unes mans netes és pot comprovar què el recompte microbià no sobrepassa de 200 colònies això vol dir què aquestes superfícies estan més o menys netes encara què hi presenten diferents tipus de microorganismes.
Conclusions
Per poguer emplacar en un medi de cultiu per a fer posteriorment un control microbiològic s'ha de tenir en compte que és necessari treballar en un lloc desinfectat, estèril, evitar qualsevol tipus de contagi.
A més alhora de liquar el medi què prèviament va estar en la nevera no és aconsellable què estigui més de 2 minuts al microones, hi desprès s'ha de deixar una estona a temperatura ambient.
També s'ha de dibuixar en paper en una superfície de 100cm2 què s'utilitzara com a motllo per a realitzar el mostreig.
S'ha de mesurar el pH del medi i comprovar si és el correcte, prèviament calibrant el pH-metre almenys s'ha de comprovar amb dos patrons.
Un cop fet tots aquest passos a l'interior de la campana de flux laminar s'introduiex la placa de petri hi es dosifica fins a saciar-lo no és pot cobrir més de 20ml, desprès s'ha deixar què és solidifiqui el medi.
Amb un hisop s´humiteja una mica amb el medi per facilitar la captació dels micrioorganismes hi ès sembren en la placa de petri en forma de zig-zag.
Darera de la placa amb un marcador s'escriu la data, el lloc de la mostra, i el nom de l'individu què a relitzat, hi s'incuba a l'estufa a 37ºC, amb el sembrat cap avall.
Bibliografia
Apunts de classe
Enciclopedia catalana
Cap comentari:
Publica un comentari a l'entrada